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NMY51酵母双杂交菌株 货号:st084
基因型:
MATahis3Δ200trp1-901leu2-3,112ade2LYS2::(lexAop)4-HIS3ura3::(lexAop)8-lacZ ade2::(lexAop) 8-ADE2 GAL4

信息:
培养基:YPDA
菌株类别:酵母菌
培养条件:28℃,有氧,YPDA
质粒转化:电转
保存方式:30%甘油,-20℃
基本应用:酵母双杂交

菌株简介:
DUALmembrane系统是DUALsystems BioTech公司开发的专门筛选跨膜蛋白间相互作用的检测技术,它利用分离的泛素系统(split-ubiquitin)直接检测天然状态下膜蛋白间的相互作用,是目前市面上唯一检测膜蛋白间相互作用的酵母双杂系统。此系统采用NMY51酵母菌株,可直接转化质粒进行蛋白互作验证或筛库试验;此菌株Transformation  marker为:  trp1, leu2-3,报告基因为:HIS3, ADE2 和 lacZ,第一步通过营养缺陷型报告基因(HIS3, ADE2)进行选择性生长筛选,进一步通过 LacZ 报告基因进行β-半乳糖分析显色的定量或半定量筛选,三个独立的报告基因,受不同启动子的调控,降低假阳性几率。原理:泛素(ubiquitin)分子量很小,由 76aa 残基组成;泛素作为降解信号分子,可以连接另外一种蛋白质的 N 端,然后被泛素专一性蛋白酶(UBPs)识别,从而导致与泛素相连的蛋白被酶解。泛素可以人为分成两部分:N 端(Nub),C 端(Cub)。首先,人为地将泛素 Nub 的 3 位异亮氨酸突变为甘氨酸(NubI 突变为 NubG)。这样与 Cub 的亲合力大大降低,避免了 Cub 和 Nub 自我结合或接近的可能性。其次,将Cub 部分与人工合成的 LexA-VP16 转录激活因子融合成一个融合蛋白Cub-LexA-VP16。正常条件下 NubG不与Cub 结合,UBPs 也不能识别分离的泛素,转录激活因子也不会被切下来。最后,将要检测的蛋白质分别与NubG和Cub融合,形成 bait 融合蛋(bait-cub-LexA -VP16)和 prey 融合蛋白(prey-NubG)。如果 bait 和 prey发生相互作用,就会促使 NubG 和 Cub 的相互接近,被 UBPs 识别,导致 LexA-VP16 的解离,进入核内,从而激活报告基因的转录。 此系统可使用四种Bait质粒:pBT3-N,pBT3-SUC,pBT3-STE,pBT3-C,筛选标志均为LEU;三种Prey质粒:pPR3-C ,pPR3-SUC,pPR3-STE,筛选标志均为TRP。NMY51酵母菌株可用YPDA在28℃有氧的条件下培养,然后使用30%的甘油保藏菌种

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