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pCold TF大肠表达质粒 货号：P1169

信息

别名 pColdTF
启动子 CSPA
复制子 pBR322
质粒分类 大肠系列质粒；大肠表达质粒；pCold系列质粒
质粒大小 5769bp
质粒标签 N-His, N-Trigger factor, N-HRV 3C, N-Thrombin, N-Factor Xa
原核抗性 Amp
克隆菌株 DH5α
培养条件 37℃
表达宿主 BL21等大肠杆菌
培养条件 37℃，有氧，LB
诱导方式 IPTG或乳糖及其类似物
5'测序引物 pCold-TF-F1（CCACTTTCAACGAGCTGATG）
3'测序引物 pCold-R（GGCAGGGATCTTAGATTCTG）
备注 冷启动表达质粒
质粒宿主 大肠杆菌
质粒用途 蛋白表达
片段类型 基因CDS
片段物种 空载体
原核抗性 氨苄青霉素

简介
          Takara的pCold TF载体是一种融合表达可溶性的标签"触发因子（Trigger Factor,TF）伴侣"的冷休克载体。"触发因子"（48KD）是原核核糖体相关的分子伴侣蛋白（48 kDa），有利于新表达的多肽的共翻译折叠。正因为它来源于大肠杆菌，保证了触发因子能够在大肠杆菌表达系统中高表达。 pCold TF载体由CSPA启动子及其下游的序列组成，其下游序列主要包括包括5'非翻译区（5'非编码区），翻译增强元件（TEE），His标签序列，多克隆位点（MCS）。Lac操纵子插入在CSPA启动子下游，以确保严格的表达调控。此外，HRV 3C蛋白酶，凝血酶，和Factor Xa识别位点位于“Trigger Factor”和多克隆位点（MCS）之间，以便表达的融合蛋白上将标签去除。 大多数大肠杆菌菌株都可以可以作为本载体的表达宿主。pCold TF载体提供冷休克诱导的方法高水平表达目的蛋白，再加上触发因子（伴侣）的表达来提高正确的蛋白质折叠，从而实现高效可溶性表达其他系统中难以对付的蛋白。
          pColdTF质粒是利用冷休克基因CSPA启动子设计高效率蛋白质表达载体。在E.COLI启动子下游处，插入了lac操纵子，以便严格控制表达。此外，5’非翻译区（5’UTR），翻译增强元件（TEE）,His标签序列，Xa因子切割位点和多克隆位点（MCS）位于CAPS启动子的下游。当培养温度切换到低温时，大肠杆菌暂时停止生长，大部分的大肠杆菌蛋白质表达减少，但是一类称为冷休克蛋白的蛋白质被特异性诱导表达。

图谱



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