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网站首页 >> pKD46大肠敲除质粒 货号：P1247
pKD46大肠敲除质粒 货号：P1247

信息

启动子 araBAD
复制子 pSC101
终止子 λ tL3 terminator
原核抗性 Amp
克隆菌株 DH5α
培养条件 30℃
表达宿主 大肠杆菌
诱导方式 阿拉伯糖
质粒宿主 大肠杆菌
质粒用途 基因编辑
原核抗性 氨苄青霉素

简介

        pKD46质粒是目前应用最广泛的Red同源重组质粒，该质粒含有受阿拉伯糖启动子调控的exo、bet、gam基因，其复制子为低拷贝温敏型复制子，便于质粒的消除。
与同源重组基因敲除相关的3个酶：
        1、Exo蛋白：Exo蛋白是一种核酸外切酶，单亚基的分子量为24 kD，Exo蛋白的活性形式是一种环状三聚物分子，中间有一中空的通道，通道的一端可容纳双链DNA分子，另一端只可容纳单链DNA。Exo蛋白可结合在双链DNA的末端，从DNA双链的5’端向3’端降解DNA，使DNA分子形成3’粘性末端。
        2、Beta蛋白：Beta蛋白在Red同源重组中起着决定性作用，具有介导互补单链DNA退火的功能，是一种退火蛋白，单亚基的分子量为25.8 kD。在溶液中，Beta蛋白自发地形成环状结构，紧紧地结合在单链DNA的3’突出端，防止DNA被单链核酸酶降解，并介导互补单链DNA的退火。双链DNA退火完成后，Beta蛋白从DNA双链上解离下来。
        3、Gam蛋白：Gam蛋白为16kD的多肽分子，可与RecBCD核酸外切酶结合，抑制其对外源DNA的降解作用，防止外源DNA 进入细胞后被宿主降解

图谱


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