pPIC9是一个鉴定多拷贝基因插入到毕赤酵母基因组中的载体。1.pPIC9载体大小8,023 bp，是融合表达载体。2.载体构建过程中，可供使用的单一限制性内切酶位点为Xho I, SnaB I, EcoR I, Avr II, Not I. 3.利用alpha因子分泌信号肽，分泌表达蛋白基因。4.在载体构建过程中，你的基因必须保证与信号肽的起始密码子的读码框一致。5.毕赤酵母中利用HIS4进行筛选。6.为了将基因插入GS115或KM71的AOX区, 使用SacI限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+Mut+基因型，KM71中产生His+ MutS基因型) 7..为了将基因插入GS115或KM71的His4区, 使用Sal I或者Stu I限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+ Mut+基因型，KM71中产生His+ MutS基因型) 8.将基因插入GS115的AOX1区域，需要使用Bgl II线性化质粒 (产生His+MutS基因型)。